垂直电泳槽高效使用指南：从装板到转印的常见问题解决方案

　　垂直电泳槽高效使用指南：从装板到转印的常见问题解决方案

　　以下是天津天正信达对垂直电泳槽从装板到转印的全流程优化指南及常见问题解决方案：

　　一、‌装板与制胶关键步骤‌

　　玻璃板组装‌

　　使用前需用洗涤剂清洗玻璃板，避免残留物干扰电场分布;

　　安装防漏胶条时需均匀按压，防止电泳液渗漏导致短路。

　　凝胶配制‌

　　分离胶浓度‌：根据蛋白分子量选择(如10%胶适合10-200kDa蛋白);

　　凝固控制‌：夏季减少AP(过硫酸铵)用量10%-20%，冬季可适当增加。

　　灌胶技巧‌

　　灌分离胶后覆盖去离子水隔绝空气，确保界面平整;

　　浓缩胶需快速灌入并插入梳子，避免分层不均。

　　二、‌电泳运行优化‌

　　上样规范‌

　　蛋白上样量建议30-50μg，盐浓度需<100mM以防条带扭曲;

　　空置加样孔需补Loading Buffer，防止相邻样品扩散。

　　电泳参数‌

　　电压设置‌：浓缩胶阶段60-90V，进入分离胶后调至120-150V;

　　温度管理‌：高温环境建议连接冷却循环系统(15-20℃)。

　　缓冲液选择‌

　　SDS-PAGE推荐Tris-Glycine缓冲液，转印实验需换用Towbin缓冲液。

　　三、‌转印常见问题与解决‌

　　问题现象‌ ‌原因分析‌ ‌解决方案‌

　　转印效率低(蛋白残留凝胶) 转印时间不足或膜-胶接触不良 增加转印时间(1-2小时)，检查三明治结构是否紧密

　　膜上出现气泡伪影 转印夹组装时未排尽气泡 使用玻璃棒滚动排除气泡，确保膜与胶贴合

　　背景高或非特异条带 封闭不充分或抗体浓度过高 延长封闭时间(1-2小时)，优化抗体稀释比例

　　四、‌设备维护与保养‌

　　电极维护‌：每次使用后蒸馏水冲洗铂金电极，防止盐结晶腐蚀;

　　密封检查‌：定期更换老化胶条，避免电泳液泄漏;

　　长期存放‌：拆卸玻璃板与胶框，避免塑料变形。

　　通过规范操作与针对性调整，可显著提升垂直电泳的分离效率与转印成功率。

　　BS-300 基础性电泳仪电源

　　BS-600C 通用型电泳仪电源

　　BS-mini01 垂直电泳槽(双板)

　　BS-mini04 垂直电泳槽(四板)

　　BS-ZY03 转印电泳槽(WB双板和铂乐通用)

　　BS-ZY04 转印电泳槽 (WB四板)

　　BS-sub02 琼脂糖电泳槽

　　注：以上资料仅供参考，不作为实际标准，具体请咨询技术老师。

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