人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒检测原理、操作步骤

　　人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒检测原理、操作步骤

　　以下是关于人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒的实验说明书，结合检测原理、操作步骤及注意事项进行详细说明：

　　一、‌检测原理‌

　　采用‌双抗体夹心法‌或‌竞争法‌(不同品牌可能差异)：

　　夹心法‌：包被抗体捕获样本中的8-OHdG，再与酶标抗体结合形成复合物，通过底物显色(TMB)测定吸光度(OD值)，浓度与颜色深度正相关‌。

　　竞争法‌：样本中的8-OHdG与生物素标记抗原竞争结合固相抗体，OD值与浓度负相关‌。

　　二、‌试剂盒组成‌

　　组分‌ ‌说明‌

　　预包被微孔板‌ 12孔×8条，含抗8-OHdG抗体‌。

　　标准品‌ 浓度梯度(如0-4000pg/ml或0-200ng/L)，需按说明书稀释‌。

　　酶标试剂/检测抗体‌ HRP标记抗体，避光保存‌。

　　洗涤液‌ 30倍浓缩，需稀释后使用‌。

　　显色液(TMB)‌ A液(H₂O₂)与B液(TMB)需等体积混合‌。

　　终止液‌ 2N H₂SO₄，显色后终止反应‌。

　　三、‌样本处理要求‌

　　血清/血浆‌：离心(3000rpm, 10分钟)去除颗粒，避免溶血或反复冻融‌。

　　细胞上清/组织匀浆‌：离心后取上清，分装保存于-20℃‌。

　　禁用NaN3‌：会抑制HRP酶活性‌。

　　四、‌操作步骤‌

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释(如4000→62.5pg/ml)，设复孔‌。

　　加样‌：每孔加标准品或样本100μl，37℃孵育120分钟‌。

　　洗涤‌：拍干后加洗涤液浸泡1-2分钟，重复4-6次‌。

　　显色‌：加TMB工作液100μl，37℃避光反应15-30分钟‌。

　　终止与检测‌：加终止液50μl，30分钟内测450nm OD值‌。

　　五、‌结果计算‌

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制曲线，计算样本浓度‌。

　　灵敏度‌：检测限通常为30-45.8pg/ml‌。

　　重复性‌：板内/板间变异系数<10%‌。

　　六、‌注意事项‌

　　质量控制‌：每次实验需做标准曲线及空白对照‌。

　　密封保存‌：开封板条需干燥密封，避免受潮‌。

　　温度控制‌：试剂盒保存于2-8℃，避免冻存酶标试剂‌。

　　仅限科研‌：不可用于临床诊断‌。

　　以上步骤需严格遵循试剂盒说明书，不同品牌可能存在细节差异‌。

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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