如何区分ELISA已加样孔和未加样孔?

　　在ELISA实验中，准确区分已加样孔和未加样孔至关重要，可避免重复加样或漏加样，从而保证数据的准确性。以下是几种实用的区分方法：

　　1. 物理标记法(推荐)

　　(1) 使用可擦写板盖标记

　　工具：防水实验室记号笔(如VWR或Thermo Scientific品牌)或可擦写标签贴。

　　方法：

　　加样后立即在板盖对应孔位置画“✓"或标注样本编号。

　　结束后用酒精棉片擦拭干净，方便重复使用。

　　优点：直观、操作快捷，适合手工操作。

　　(2) 孔位布局规划

　　模板化加样：

　　提前设计加样顺序(如“从左到右，逐行加样")，并用空白对照孔作为分界标记。

　　示例：第1行加标准品，第2行加待测样本，第3行留空(阴性对照)。

　　2. 可视化辅助法

　　(1) 液体高度观察

　　适用情况：加样量≥50 μL时。

　　方法：

　　倾斜微孔板，观察孔内液面反光(已加样孔可见明显液面，未加样孔为干燥状态)。

　　注意：需在白色背景光下观察，避免强光直射。

　　(2) 显色预判(针对彩色样本)

　　适用样本：含血红蛋白(红色)、细胞裂解液(浑浊)等有色样本。

　　方法：直接通过颜色区分，但需注意无色样本(如缓冲液)不适用。

　　3. 技术辅助法

　　(1) 多通道移液器同步加样

　　操作：

　　使用8通道或12通道移液器，按行/列一次性加样(避免单孔遗漏)。

　　加样后移液器枪头仍停留在孔中，作为物理标记。

　　优点：高效且不易出错，适合高通量实验。

　　(2) 自动化记录

　　电子表格跟踪：

　　提前在Excel中绘制96孔板模板，加样后实时填写孔位状态。

　　示例：

　　孔位A1  A2  A3...

　　样本S1  S2  NC...

　　4. 防错设计(预防漏加/重复加样)

　　(1) 板架分区

　　将微孔板放置在标有“已加样"和“未加样"区域的板架上，加样后移动位置。

　　(2) 双人核对

　　一人加样，另一人实时核对记录，尤其适用于临床样本检测。

　　5. 疑难问题解决

　　问题：加样后液体挥发，难以辨别是否已加样。

　　解决：

　　缩短加样到孵育的时间间隔(如分批加样)。

　　使用带密封盖的微孔板(防止蒸发)。

　　问题：部分孔因气泡干扰观察。

　　解决：加样后离心微孔板(1000 ×g，1分钟)去除气泡。

　　总结

　　方法适用场景注意事项

　　板盖标记法手工操作、少量样本需使用可擦写笔

　　液体高度观察加样量≥50 μL需良好光线条件

　　多通道移液器同步加样高通量实验需校准移液器通道一致性

　　电子表格记录复杂实验设计(如多批次样本)需实时更新记录

　　推荐策略：

　　常规实验：板盖标记 + 多通道移液器。

　　高通量检测：自动化记录 + 双人核对。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，如需完整版产品信息请咨询品牌供应商或技术老师。

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