Elisa实验：elisa试剂盒显色液a和b液

　　以下是关于ELISA试剂盒中显色液A和B液的详细说明：

　　一、主要成分与作用

　　显色液A(过氧化氢溶液)‌

　　主要成分为H₂O₂，作为受氢体参与HRP(辣根过氧化物酶)催化反应，生成活性氧中间体‌。

　　显色液B(TMB溶液)‌

　　主要成分为四甲基联苯胺(TMB)，作为供氢体(DH₂)，与HRP催化产生的活性氧反应生成蓝色阳离子自由基，终止后变为黄色‌。

　　二、反应机制

　　HRP催化反应‌：

　　HRP + H₂O₂ → HRP-活性氧复合物

　　HRP-活性氧复合物 + TMB → 蓝色产物 + HRP

　　终止液(如硫酸)加入后，蓝色产物转化为黄色‌。

　　三、操作注意事项

　　添加顺序‌

　　需先加A液(H₂O₂)后加B液(TMB)，以确保HRP充分催化H₂O₂生成活性氧，再与TMB反应‌。

　　稳定性‌

　　TMB显色液需现配现用(2小时内)，避免氧化失效‌。

　　操作时需戴手套，避免皮肤接触(TMB为潜在致癌物)‌。

　　四、其他底物对比

　　酶类型 显色液A 显色液B 产物颜色

　　HRP H₂O₂ TMB/OPD 蓝→黄

　　AP 缓冲液 PNP(对硝基苯磷酸酯) 黄(405nm)

　　GOD 葡萄糖 对硝基蓝四氮唑 蓝沉淀 ‌

　　五、常见问题

　　显色异常‌：若终止液含还原剂，可能导致蓝色产物褪色‌。

　　替代方案‌：OPD可作为TMB的替代显色剂，但毒性更高‌。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实际数据，如需其他请咨询技术老师或品牌供应商。

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