ELISA实验“避坑”手册：样本处理中的关键细节

　　ELISA实验“避坑”手册：样本处理中的关键细节
 

　　ELISA实验中样本处理是影响结果准确性的关键环节，以下是常见样本类型的处理要点及避坑指南：
 

　　一、血清样本处理
 

　　静置与离心‌：全血需室温静置2小时或4℃过夜使细胞沉降，随后以2000g离心10分钟获取上清‌。
 

　　避坑：未离心直接加样会导致杂质干扰，离心后需避免吸到沉淀层。
 

　　储存条件‌：短期存放建议2-8℃(≤1周)，长期保存需分装后-20℃(1个月内)或-80℃(1个月以上)‌。
 

　　二、血浆样本处理
 

　　抗凝与离心‌：采集后需立即加入抗凝剂(如EDTA)，30分钟内以1000g离心15分钟‌。
 

　　避坑：抗凝剂选择不当(如肝素可能干扰检测)或离心延迟会导致纤维蛋白原残留。
 

　　冻存注意‌：避免反复冻融，建议分装后-80℃保存‌。
 

　　三、组织样本处理
 

　　匀浆方法‌：取100mg组织，用PBS冲洗后研磨或超声裂解，结合反复冻融(2次)破坏细胞膜‌。
 

　　避坑：组织块未充分匀浆会导致目标蛋白释放不全，影响检测灵敏度。
 

　　离心参数‌：低温离心(4℃)后取上清，避免脂质或细胞碎片干扰‌。
 

　　四、通用注意事项
 

　　样本污染‌：操作需无菌，避免细菌或外源蛋白引入假阳性。
 

　　稀释优化‌：高浓度样本需预实验确定稀释倍数，确保检测值在标准曲线范围内。
 

　　冻融控制‌：反复冻融不超过3次，避免蛋白降解‌。
 

　　通过规范样本处理流程，可显著减少假阳性/阴性结果，提升ELISA数据的可靠性‌。
 

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
 

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