酶联免疫吸附测定(ELISA)技术：原理、方法与问题解析

　　酶联免疫吸附测定(ELISA)技术：原理、方法与问题解析

　　ELISA技术就其核心原理是将抗原/抗体固定在固相载体上，通过酶标记物催化显色反应进行定量分析。具体可分为三种主流方法：

　　一、核心原理

　　固相包被‌：抗原或抗体吸附于聚苯乙烯微孔板，保持免疫活性。

　　酶标记与结合‌：酶(如HRP)与抗体/抗原共价连接，形成酶标结合物。

　　显色定量‌：加入底物后，酶催化生成有色产物，吸光度值与待测物浓度成正比。

　　二、主要方法类型

　　直接法‌：酶标记抗体直接与固相抗原结合，显色深浅反映抗原量。

　　间接法‌：抗原包被后，加入待测抗体，再用酶标二抗检测，适用于抗体检测。

　　双抗体夹心法‌：两种抗体分别包被和检测抗原，特异性高，适用于大分子抗原(如乙肝表面抗原)。

　　竞争法‌：待测抗原与酶标抗原竞争结合固相抗体，显色强度与待测物浓度成反比，适用于小分子抗原检测。

　　三、关键问题解析

　　试剂盒选择‌：需关注抗体特异性、检测下限及板内变异系数(CV<15%)。

　　操作要点‌：严格控制洗涤步骤，避免非特异性结合;显色时间需精确控制。

　　常见干扰‌：类风湿因子(RF)可能导致假阳性，需通过预处理或选择抗RF干扰的试剂盒解决。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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