人铁蛋白(Ferritin)ELISA试剂盒检测原理
人铁蛋白(Ferritin)ELISA试剂盒的检测原理主要基于双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),通过特异性抗体识别并定量检测样本中的人铁蛋白浓度,具有高灵敏度和良好特异性。
一、核心检测流程
固相抗体包被
酶标板微孔内预包被了高亲和力的特异性单克隆抗人铁蛋白抗体,作为“捕获抗体",用于固定样本中的目标抗原。
样本与标准品加样
向微孔中加入待测样本或已知浓度的标准品。若样本中含有铁蛋白,会与包被抗体特异性结合,形成“固相抗体-抗原"复合物。
酶标抗体结合
加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的检测抗体,该抗体识别铁蛋白的另一表位,从而形成“固相抗体-抗原-酶标抗体"的夹心结构。
洗涤去除非特异成分
通过多次洗涤,去除未结合的酶标抗体及其他杂质,减少背景干扰,提高检测准确性。
显色反应
加入TMB底物液,在HRP催化下生成蓝色产物,反应一定时间后加入1N盐酸终止反应,溶液颜色由蓝变黄。
吸光度测定与定量分析
使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)。OD值与样本中铁蛋白浓度呈正比,通过标准曲线即可计算出待测样本的实际浓度。
二、特点
高特异性:采用两种不同表位的单克隆抗体,显著降低交叉反应风险。
灵敏度高:可检测低至几ng/mL的铁蛋白水平,适用于早期筛查和科研定量。
操作标准化:试剂盒提供完整组分和说明书,适合批量样本处理。
注意:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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