猪支原体抗体(MAb)ELISA试剂盒实验使用说明书 以下是猪支原体抗体(MAb)ELISA试剂盒的实验使用说明综合指南： BS-4652 猪支原体抗体(MAb)ELISA试剂盒 一、实验原理 采用双抗原夹心法或间接法ELISA技术，通过包被抗原与样本中抗体结合，再与HRP标记抗原/抗体形成复合物，经TMB显色后测定450nm吸光度(OD值)，颜色深浅与抗体浓度呈正相关。 二、试剂盒组成 预包被微孔板 标准品(冻干粉，需复溶) 酶标试剂(HRP标记物) 浓缩洗涤液(20-30倍稀释使用) TMB显色底物 终止液(酸性溶液) 说明书及质检报告 三、样本处理要求 血清：室温凝固2小时或4℃过夜后离心(1000×g, 20分钟)，避免溶血或反复冻融。 血浆：EDTA/肝素抗凝，30分钟内离心(1000×g, 15分钟)。 组织匀浆：按1:9比例用PBS匀浆，离心取上清。 四、标准品稀释步骤 复溶：加入1mL稀释液溶解冻干标准品(10,000pg/mL母液)。 梯度稀释：按说明书进行倍比稀释(如5,000→2,500→...→78pg/mL)，标准品稀释液作空白对照。 五、实验操作流程 加样： 标准品孔：50μL不同浓度标准品(双复孔) 样本孔：50μL待测样本。 孵育：37℃温育60分钟，洗板5次(每孔350μL洗涤液)。 显色：每孔加TMB底物50μL，37℃避光反应15分钟。 终止：加终止液50μL，15分钟内测OD450值。 六、注意事项 试剂平衡：使用前室温平衡30分钟，浓洗涤液需水浴助溶。 质量控制：批内CV<10%，批间CV<12%。 干扰因素：细菌污染、反复冻融、溶血会导致假阳性/假阴性。 结果判读：建议用四参数拟合标准曲线计算浓度。 七、常见问题 显色异常：检查显色剂有效期及避光情况。 洗板误差：确保充分洗涤，避免孔间交叉污染。 标准曲线异常：检查稀释准确性及酶标仪校准。 (注：具体操作参数请以试剂盒说明书为准) 注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师及品牌供应商! | 
