ELISA实验中的抗原抗体互作：原理、优化及常见问题

　　ELISA实验中的抗原抗体互作：原理、优化及常见问题

　　以下是天正信达关于ELISA实验中‌抗原抗体互作‌的核心要点总结，涵盖作用原理、实验优化及常见问题解决方案：

　　一、抗原抗体互作原理

　　结合机制‌

　　抗原表位与抗体互补决定区(CDR)通过氢键、疏水作用等非共价键特异性结合。

　　固相载体(如聚苯乙烯微孔板)通过物理吸附固定抗原/抗体，保留其免疫活性。

　　信号放大‌

　　酶标记抗体(如HRP标记)催化底物显色，将免疫反应转化为可检测信号。

　　二、实验优化策略

　　包被条件优化‌

　　浓度‌：抗原/抗体包被浓度需预实验确定(通常1-10 μg/ml)。

　　缓冲液‌：碳酸盐缓冲液(pH 9.6)优于PBS，增强疏水吸附。

　　封闭剂选择‌

　　常用5% BSA或脱脂奶粉封闭非特异性位点，减少背景信号。

　　脂质抗原需使用疏水表面及酒精溶解缓冲液。

　　温育控制‌

　　湿盒孵育或水浴温育(37℃)避免边缘孔蒸发差异。

　　三、常见问题与对策

　　问题‌ ‌可能原因‌ ‌解决方案‌

　　高背景信号‌ 封闭不充分或抗体交叉反应 更换封闭剂或优化抗体浓度

　　低灵敏度‌ 包被抗原表位遮蔽或酶活性降低 调整抗原构象或更换新鲜底物

　　边缘效应‌ 温育湿度不均或孔间蒸发差异 使用湿盒孵育，边缘孔填充缓冲液

　　重复性差‌ 加样误差或洗涤不 校准移液器，增加洗涤次数

　　四、不同类型ELISA的互作特点

　　双抗夹心法‌：需配对抗体识别抗原不同表位，避免空间位阻。

　　竞争法‌：待测抗原与酶标抗原竞争结合抗体，信号与浓度负相关。

　　间接法‌：二抗放大信号，但需注意种属交叉反应。

　　通过上述优化与问题排查，可显著提升ELISA检测的准确性与重复性。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实际标准，具体请咨询技术老师。

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