ELISA试剂盒组织匀浆液的细节处理及使用原则

　　ELISA试剂盒组织匀浆液的细节处理及使用原则

　　以下是天正信达ELISA试剂盒组织匀浆液的细节处理及使用原则的综合指南，基于最新实验规范整理：

　　一、组织匀浆液制备关键步骤

　　样本预处理‌

　　用预冷PBS(0.01M, pH 7.4)冲洗组织，清除表面血液和杂质

　　去除筋膜/脂肪等冗余组织，避免非特异性干扰

　　匀浆比例控制‌

　　推荐组织与缓冲液重量体积比1:5~1:9(如1g组织加5-9mL PBS)

　　需记录实际比例以便数据校正

　　裂解方法选择‌

　　机械匀浆‌：冰浴条件下使用玻璃匀浆器研磨至糜状

　　超声辅助‌：功率200W超声3-5秒/次(冰浴间歇操作)

　　冻融循环‌：限2次以内(-80℃冷冻→室温解冻)

　　离心参数‌

　　4℃ 5000×g离心5-10分钟取上清

　　肝/脑等特殊组织需16000×g离心30分钟

　　二、缓冲液配置原则

　　基础缓冲液‌

　　推荐含蛋白酶抑制剂的预冷PBS(pH 7.2-7.4)

　　特殊样本需添加：

　　• 1% Triton X-100(膜蛋白提取)

　　• 200μM PMSF(丝氨酸蛋白酶抑制)

　　抑制剂使用‌

　　临用前加入抑制剂混合物(1:100比例)

　　避免含NaN3的缓冲液(抑制HRP活性)

　　三、保存与质控要求

　　分装存储‌

　　短期：4℃保存≤1周

　　长期：-80℃分装(避免反复冻融)

　　使用前处理‌

　　室温缓慢复融(禁止加热)

　　再次离心去除沉淀物

　　质控指标‌

　　蛋白浓度建议0.5-2mg/mL

　　溶血样本需检测血红蛋白干扰(OD414nm<0.2)

　　四、洗液使用规范

　　匹配原则‌

　　优先使用原装配套洗液

　　禁止混用不同厂家/批号洗液

　　替代方案‌

　　紧急情况下可用同项目其他品牌洗液

　　需验证pH(7.2-7.6)和导电率

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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