影响ELISA试剂盒试验成果的要素

　　影响ELISA试剂盒试验成果的要素

　　以下是天正信达对影响ELISA试剂盒试验成果的关键要素及控制方法，综合多篇文献整理：

　　一、试剂相关因素

　　抗体/抗原质量‌

　　抗体效价下降或交叉反应会导致假阳性/假阴性

　　控制方法：选择高特异性抗体，避免使用过期试剂

　　酶结合物浓度‌

　　浓度过高易致背景信号增强，过低则灵敏度下降

　　控制方法：严格按说明书稀释，不同批号禁止混用

　　试剂保存条件‌

　　未避光保存或反复冻融会使底物失效

　　控制方法：开封后1个月内用完，酶标试剂需-20℃保存

　　二、样本处理因素

　　溶血/脂血干扰‌

　　血红蛋白类过氧化物酶活性会干扰HRP系统

　　控制方法：3000g离心20分钟去除杂质

　　反复冻融‌

　　超过3次冻融可使蛋白降解(尤其细胞因子)

　　控制方法：分装冻存于-80℃，避免温度波动

　　抗凝剂选择‌

　　EDTA会抑制HRP活性，肝素增加OD值

　　控制方法：血清样本优先，血浆需匹配抗凝剂类型

　　三、操作技术要点

　　加样准确性‌

　　移液器未校准可使误差>5%(尤其微量样本)

　　控制方法：每年校准移液器，加样至孔底1/3处

　　温育控制‌

　　温度波动>1℃或未密封会导致"边缘效应"

　　控制方法：使用水浴箱，禁止叠放反应板

　　洗涤充分性‌

　　残留洗涤液会增高背景(假阳性)

　　控制方法：手工洗板需拍干，洗板机检查针头堵塞

　　四、仪器与环境

　　酶标仪校准‌

　　滤光片波长偏差(如TMB用450nm非490nm)

　　控制方法：开机预热15分钟，定期校验

　　温湿度控制‌

　　湿度>70%易致板条受潮，<40%加速液体蒸发

　　控制方法：实验室维持45%-65%湿度

　　五、特殊注意事项

　　组织样本处理‌

　　假阳性排查‌

　　类风湿因子干扰需用阻断剂处理

　　验证方法：加标回收率测试(80%-120%)

　　关键建议‌：

　　每板设置复孔(CV<15%)和阴阳性对照

　　显色时间控制在10-15分钟，强阳性孔提前终止

　　优先选择被CNS论文引用的试剂盒品牌

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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