天正信达解说ELISA试剂盒容易操作失误的地方

　　天正信达解说ELISA试剂盒容易操作失误的地方

　　以下是天正信达对ELISA试剂盒操作中容易失误的关键环节及专业解决方案，综合实验操作要点和常见问题整理：

　　一、试剂准备阶段

　　试剂平衡不足‌

　　未室温平衡30分钟直接使用，导致反应温度不均(尤其HRP酶在低温下活性降低)

　　解决方案：提前取出试剂盒，平衡至22-25℃后再开封

　　标准品复溶错误‌

　　冻干粉未离心溶解或使用非配套稀释液，造成浓度偏差

　　解决方案：复溶前3000rpm离心1分钟，严格按说明书体积稀释

　　二、样本处理环节

　　血清分离不当‌

　　血液未充分凝固(<30分钟)或离心力不足(<2000g)，导致纤维蛋白原残留引发假阳性

　　解决方案：37℃静置1-2小时后，3000g离心20分钟

　　样本保存失误‌

　　反复冻融(>3次)或-20℃保存超1个月，使抗原降解

　　解决方案：分装冻存于-80℃，避免冻融循环

　　三、加样操作要点

　　移液器使用错误‌

　　未校准移液器或吸头密封不严，导致加样量波动(误差>5%)

　　解决方案：每年校准移液器，加样时吸头紧贴孔底避免气泡

　　加样顺序混乱‌

　　先加酶标抗体后加样本，造成非特异性结合

　　解决方案：严格按说明书"样本→抗体→底物"顺序操作

　　四、温育过程控制

　　温度与时间偏差‌

　　使用普通培养箱(非水浴箱)导致温度波动>1℃

　　解决方案：校准孵育箱温度，禁止叠放反应板

　　蒸发问题‌

　　未使用湿盒或封板膜，边缘孔液体蒸发致浓度升高

　　解决方案：孵育时反应板置于铺湿纱布的密闭盒内

　　五、洗涤与显色

　　洗涤不‌

　　手工洗板拍打力度不均或洗板机针头堵塞，残留物增加背景

　　解决方案：每孔注满洗液，静置1分钟后拍干

　　显色控制不当‌

　　显色超过15分钟未终止，导致OD值饱和

　　解决方案：每隔5分钟观察颜色变化，强阳性孔提前终止

　　六、数据读取误区

　　读板延迟‌

　　终止反应后>10分钟读数，酸性环境使显色物分解

　　解决方案：终止后5分钟内完成读数

　　波长设置错误‌

　　TMB底物误用490nm(正确应为450nm)

　　解决方案：核对酶标仪滤光片匹配底物类型

　　关键建议‌：

　　每批次实验设置复孔(CV<15%)和质控品

　　不同批号试剂禁止混用，开封后1个月内用完

　　溶血/脂血样本需离心过滤后检测

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

　　天津天正信达供应：RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，我司拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。