ELISA实验中关于跳孔、信号变化的疑问及回答

　　ELISA实验中关于跳孔、信号变化的疑问及回答

　　以下是天正信达对ELISA实验中关于跳孔(Drift)和信号变化的常见疑问及专业解答，综合实验操作要点和故障排查经验整理：

　　一、跳孔(Drift)问题解析

　　试剂配制中断的影响‌

　　中断可能导致标准曲线波动，建议在15-20分钟内完成配制并加样(除非说明书特别说明)

　　未平衡的试剂会因温度不均导致孔间信号变异，需室温平衡30分钟

　　移液器选择‌

　　底物或酶结合物等试剂推荐使用多道移液器，确保加样一致性

　　盖板使用规范‌

　　需按说明书要求使用配套盖板，边缘不契合会导致信号差异

　　酶标仪设置‌

　　读数时间超过2秒/孔会因反应延迟导致OD值变异，建议设为1秒/孔

　　孵育时间调整‌

　　擅自更改时间或温度会导致反应失衡，需严格遵循说明书

　　二、信号变化异常原因与对策

　　底物处理问题‌

　　混合后的底物需15分钟内使用(化学发光底物4小时内)，过早混合可能变色

　　冻干底物需按说明书溶解，避光保存

　　显色异常类型‌

　　白板(无显色)‌：可能因漏加酶标抗体、底物失效或洗涤液误用终止液

　　显色弱‌：试剂未平衡、孵育温度不足或HRP污染导致

　　显色过快‌：酶标抗体过量或底物接触金属器械

　　背景信号控制‌

　　高背景多因洗涤不(需浸泡1分钟/次)或封闭不充分(延长至1-2小时)

　　链霉亲和素-HRP过量需调整稀释比例

　　三、关键操作建议

　　加样顺序‌：严格按说明书步骤，避免交叉污染

　　环境控制‌：显色阶段需避光，温度稳定在22-25℃

　　质控设置‌：每板需设阴阳性对照及复孔，CV%应<15%

　　若问题持续，建议检查试剂有效期、校准移液器，并联系厂商获取批次特异性数据。

　　注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。

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