小鼠尿素氮(BUN)ELISA试剂盒解析

　　小鼠尿素氮(BUN)ELISA试剂盒解析

　　实验原理实验

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠尿素氮(BUN)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠尿素氮(BUN)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

　　一、试剂盒核心参数对比‌

　　检测范围‌

　　典型范围：60-1600 pmol/L(BALB/c小鼠样本)‌

　　其他方法：比色法试剂盒可达0.05-1 mmol/L(血清/血浆)‌

　　灵敏度与精密度‌

　　批内CV≤5.0%，批间CV≤8.0%(酶联速率法)‌

　　超敏试剂盒可检测pg/mL级浓度‌

　　二、试剂盒组成与原理‌

　　关键组分‌

　　包被抗体‌：小鼠抗BUN单抗包被微孔板‌

　　酶标抗体‌：HRP标记的BUN抗体(辣根过氧化物酶)‌

　　底物系统‌：TMB显色液(最终显黄色)‌

　　检测原理‌

　　双抗体夹心法‌：抗原-抗体-酶标抗体复合物形成后显色定量‌

　　竞争法‌：适用于小分子检测(如激素)‌

　　三、样本处理与操作要点‌

　　样本要求‌

　　类型‌：血清、血浆(避免肝素抗凝剂干扰)‌

　　保存‌：-20℃避免反复冻融(含NaN₃样本禁用)‌

　　操作步骤‌

　　标准品稀释‌：需5倍梯度稀释(如1600→800→400 pmol/L)‌

　　温育条件‌：37℃ 30分钟(封板膜密封)‌

　　四、常见问题与解决方案‌

　　显色异常‌

　　可能原因：底物失效或温育时间不足。

　　处理：检查试剂有效期，延长温育至显色稳定‌

　　背景值高‌

　　可能原因：洗涤不净或非特异性结合。

　　处理：增加洗涤次数(≥3次)‌

　　注：不同品牌试剂盒参数可能差异较大，建议以实际说明书为准。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 ELISA试剂盒

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