ELISA实验常见错误及解决方案
一、标准曲线异常
问题表现：线性差(R²低)、梯度不明显
主要原因：标准品稀释错误、孔间污染、孵育条件不均
解决方案：
使用新鲜配制的标准品，采用反向稀释法精确梯度稀释
更换移液器吸头，避免交叉污染
检查孵育设备(如酶标板水平度、温度稳定性)
二、高背景信号
问题表现：阴性对照显色明显
主要原因：封闭不充分、洗涤不净、抗体浓度过高
解决方案：
优化封闭条件(延长封闭时间或更换封闭剂，如5% BSA)
增加洗涤次数(3-5次，每孔注满洗涤液浸泡30秒)
滴定抗体浓度或更换高特异性抗体
三、重复性差
问题表现：复孔间差异大
主要原因：加样误差、孵育条件波动、边缘效应
解决方案：
使用多通道移液器或校准单通道移液器
孵育时覆盖板盖，避免蒸发和温度波动
弃用酶标板边缘孔位
四、灵敏度低
问题表现：显色淡或无信号
主要原因：试剂失效、孵育时间不足、样本处理不当
解决方案：
检查试剂有效期(尤其酶标记物和底物需避光保存)
延长抗体或底物孵育时间(需预实验优化)
避免样本反复冻融，分装保存于-80℃
五、显色异常
问题表现：颜色不均匀、沉淀
主要原因：底物污染、终止反应时机不当
解决方案：
使用纯净水配制缓冲液，避免金属离子污染
严格避光操作，控制显色时间(通常10-15分钟)
六、其他常见问题
溶血/脂血干扰：离心后取上清或过滤处理
花板/跳孔：检查移液器吸头是否堵塞，确保加样位置准确
试剂交叉污染：不同试剂使用独立器皿和吸头
关键预防措施
标准化操作：严格按说明书执行，记录每批次实验条件
环境控制：保持恒温(37℃±0.5℃)、避光、湿度稳定
质控验证：设立内部质控对照，定期校准设备
注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒
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