Elisa试剂选择错误项解析

　　Elisa试剂选择错误项解析

　　ELISA试剂盒选择错误项解析需重点关注以下关键环节及解决方案：

　　一、标准品相关错误

　　稀释梯度异常‌

　　错误表现：标准曲线线性差(R²<0.99)或OD值范围不合理(最高孔OD<1.0)‌

　　解决方案：采用反向稀释法配制新鲜标准品，避免孔间污染，使用校准移液器确保精度‌

　　试剂失效‌

　　错误表现：无信号/信号过低，尤其酶标记物或底物活性丧失‌

　　解决方案：检查试剂有效期(酶标记物需避光保存)，设立内部质控对照验证试剂活性‌

　　二、抗体选择错误

　　浓度不当‌

　　错误表现：高背景或信号饱和，可能因抗体浓度过高导致非特异性结合‌

　　解决方案：通过棋盘滴定法优化抗体稀释比例，优先选择高特异性抗体‌

　　交叉反应‌

　　错误表现：假阳性(如类风湿因子干扰)，常见于含IgM样本‌

　　解决方案：样本预吸附处理或选择F(ab')片段抗体减少干扰‌

　　三、封闭与洗涤问题

　　封闭不充分‌

　　错误表现：整板高背景显色，可能因封闭剂类型或时间不足‌

　　解决方案：延长封闭时间(1-2小时)，更换封闭剂(如5% BSA或脱脂奶粉)‌

　　洗涤不净‌

　　错误表现：孔间CV%>20%，残留未结合物质导致信号不均‌

　　解决方案：每步洗涤5次，使用含0.05% Tween-20的缓冲液浸泡1分钟‌

　　四、样本处理错误

　　溶血/污染‌

　　错误表现：假阳性(血红蛋白干扰HRP显色)或细菌污染(内源性酶活性)‌

　　解决方案：避免溶血样本，新鲜采集或分装冻存(-70℃)，离心前混匀轻柔‌

　　抗凝剂干扰‌

　　错误表现：肝素血浆OD值升高，EDTA抑制酶活性‌

　　解决方案：根据试剂盒要求选择抗凝剂(如EDTA-Na2)，预实验验证兼容性‌

　　五、操作规范建议

　　温度控制‌：孵育时覆盖板盖，避免边缘效应(弃用边缘孔或全板实验)‌

　　设备校准‌：定期验证酶标仪滤光片及移液器精度，确保OD值检测准确‌

　　通过系统排查上述环节，可显著提升ELISA实验的重复性与准确性‌。

　　注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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