ELISA试剂盒操作流程及技术要点

　　ELISA试剂盒操作流程及技术要点

　　一、实验前准备

　　试剂解冻与平衡‌：从冰箱取出试剂盒后，2-8℃解冻30分钟，再室温平衡30分钟‌。

　　试剂配制‌：

　　标准品‌：冻干标准品用稀释液溶解后，按梯度稀释(如2000→0 pg/mL)‌。

　　洗涤液‌：浓缩液按1:25稀释，混匀后使用‌。

　　抗体工作液‌：生物素化抗体按1:100稀释，现配现用‌。

　　二、操作流程

　　加样与孵育‌：

　　标准品/样本每孔100μL，37℃孵育90分钟‌。

　　加入生物素化抗体工作液，孵育60分钟‌。

　　洗涤‌：每孔300μL洗涤液，浸泡30秒，重复3-5次‌。

　　显色与终止‌：

　　加入底物溶液，避光孵育10-20分钟‌。

　　每孔50μL终止液，5分钟内测OD450值‌。

　　三、技术要点

　　加样细节‌：避免枪头触底，防止气泡和交叉污染‌。

　　孵育时间控制‌：严格计时，避免反应不充分或过度‌。

　　洗涤性‌：拍干孔内液体，确保背景干净。

　　四、注意事项

　　样本处理‌：避免溶血和反复冻融‌。

　　试剂保存‌：剩余试剂2-8℃存放，避免污染‌。

　　快速检测‌：一步法ELISA仅需1小时，适合紧急实验。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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