标签:ELISA试剂盒 天正信达试剂盒 生物试剂 酶标板 吸头 标准品
ELISA试剂盒常见问题及预防措施
一、ELISA操作流程技术要点
加样细节:
使用专用加样器,避免气泡产生,枪头不可触及孔壁。
不同试剂更换吸头,防止交叉污染。
加样量需准确,避免孔间不一致。
孵育控制:
严格按说明书温度(通常37℃)和时间(如1小时)孵育,避免温度波动。
孵育期间确保酶标板平放,避免液体溢出。
洗涤性:
洗涤液现用现配,每孔注满洗涤液,浸泡时间一致(30-60秒)。
甩板时快速翻转120-150度,避免残留液体污染相邻孔。
样本处理:
避免溶血和反复冻融,分装后-20℃或-70℃保存。
混匀时轻柔颠倒,避免剧烈振荡。
试剂保存:
试剂盒4℃-8℃冷藏,避免冷冻;使用前室温回温40-60分钟。
标准品分装后-20℃保存,严禁反复冻融。
二、常见问题及预防措施
背景颜色深/非特异性染色:
原因:洗涤不充分、试剂污染、显色时间过长。
措施:严格洗涤步骤,更换吸头,控制显色时间。
所有孔均无明显颜色:
原因:试剂混淆、酶标物失活、遗漏步骤。
措施:核对试剂标签,检查有效期,按流程操作。
标准曲线不佳:
原因:标准品配制错误、储存不当、稀释过早。
措施:现配现用,避免室温放置过久,按说明书稀释。
重复性差:
原因:加样不准、孔间污染、仪器问题。
措施:校准加样器,避免交叉污染,定期维护仪器。
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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