ELISA试剂盒操作流程中哪些步骤最关键?

　　ELISA试剂盒操作流程中哪些步骤最关键?  天津天正信达  Elisa试剂盒

　　一、ELISA试剂盒操作流程及技术要点

　　加样细节‌：

　　使用专用加样器，避免气泡产生，枪头不可触及孔壁。

　　不同试剂更换吸头，防止交叉污染。

　　加样量需准确，避免孔间不一致。

　　孵育控制‌：

　　严格按说明书温度(通常37℃)和时间(如1小时)孵育，避免温度波动。

　　孵育期间确保酶标板平放，避免液体溢出。

　　洗涤性‌：

　　洗涤液现用现配，每孔注满洗涤液，浸泡时间一致(30-60秒)。

　　甩板时快速翻转120-150度，避免残留液体污染相邻孔。

　　样本处理‌：

　　避免溶血和反复冻融，分装后-20℃或-70℃保存。

　　混匀时轻柔颠倒，避免剧烈振荡。

　　试剂保存‌：

　　试剂盒4℃-8℃冷藏，避免冷冻;使用前室温回温40-60分钟。

　　标准品分装后-20℃保存，严禁反复冻融。

　　二、常见问题及预防措施

　　背景颜色深/非特异性染色‌：

　　原因：洗涤不充分、试剂污染、显色时间过长。

　　措施：严格洗涤步骤，更换吸头，控制显色时间。

　　所有孔均无明显颜色‌：

　　原因：试剂混淆、酶标物失活、遗漏步骤。

　　措施：核对试剂标签，检查有效期，按流程操作。

　　标准曲线不佳‌：

　　原因：标准品配制错误、储存不当、稀释过早。

　　措施：现配现用，避免室温放置过久，按说明书稀释。

　　重复性差‌：

　　原因：加样不准、孔间污染、仪器问题。

　　措施：校准加样器，避免交叉污染，定期维护仪器。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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