ELISA实验中如何确定样本的稀释倍数
在ELISA实验中,确定血清样本稀释倍数的步骤如下:
获取标准曲线范围
从试剂盒说明书中获取标准曲线的浓度范围(如0-1000pg/mL),确保样本预测浓度落在此范围内。
预估样本浓度
参考文献或预实验数据预估样本浓度(如预计5000pg/mL)。
若无可参考数据,建议行小范围预稀释(如1:10、1:50、1:100),通过检测OD值初步判断浓度范围。
计算稀释倍数
公式:稀释倍数=样本预估浓度/标准曲线上限浓度
示例:若标准曲线上限为1000pg/mL,预估浓度为5000pg/mL,则稀释倍数为5000/1000=5倍。
验证稀释效果
稀释后检测OD值,确保其落在标准曲线的中段(通常为OD值0.5-1.5之间),若超出需调整稀释倍数重新检测。
注意事项
稀释液需与试剂盒匹配(如说明书推荐的缓冲液)。
避免过度稀释导致信号过低,或稀释不足导致超出检测范围。
通过以上步骤,可科学确定稀释倍数,确保检测结果准确可靠。
注意:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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