ELISA法转录因子活性的特点与流程

        ELISA法转录因子活性的特点与流程

        ELISA法检测转录因子活性，核心是将其DNA结合能力转化为可定量信号，比传统EMSA灵敏度高10倍，5小时内即可完成，且无需放射性物质和凝胶电泳，安全便捷，适合高通量筛选。

        实验方法特点

        高灵敏度‌：能检测到转录因子水平的微小变化，对细胞功能研究至关重要。

        高通量‌：微孔板形式可同时检测1-96个样本，效率远高于EMSA。

        操作简便‌：无需凝胶电泳和放射性标记，实验流程更安全、快速。

        定量准确‌：通过标准曲线可精确计算转录因子的DNA结合活性。

        标准操作流程

        样本制备‌：提取细胞核蛋白，确保转录因子活性完整。

        包被‌：将生物素标记的DNA探针包被于微孔板。

        结合‌：加入核蛋白样本，转录因子与探针特异性结合。

        检测‌：加入HRP标记的抗体，与转录因子结合，再加入底物显色。

        读数‌：用酶标仪测定450nm吸光度值，通过标准曲线计算活性。

        注意事项

        核蛋白提取需快速，避免蛋白酶降解。

        探针设计需针对目标转录因子的特定DNA结合位点。

        严格控制孵育时间和温度，确保结合特异性。

        洗涤需净，避免非特异性信号干扰。

        注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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