ELISA样本值低于空白值，如何处理？

    ELISA样本值低于空白值，如何处理？

    ELISA样本值低于空白值，核心处理方法是‌梯度稀释样本‌并‌规范操作‌。以下是具体步骤和原因分析：

    1.梯度稀释样本

    这是最直接有效的解决方案。对样本进行1:10、1:100等梯度稀释后重新检测。若稀释后OD值随稀释倍数增加而升高，说明原样本浓度过高，发生了‌钩状效应‌‌。通过稀释可使其浓度落入试剂盒线性范围内，从而获得准确结果。

    2.检查试剂保存状态

    确保所有试剂（尤其是酶标抗体）均在有效期内，并严格按说明书要求保存（如2-8℃避光）。试剂活性不足会导致信号值偏低‌。

    3.校准移液器并规范操作

    使用前校准移液器，确保加样体积准确。

    避免空白孔被HRP污染或洗涤不净，这会导致空白值偏高，相对使样本值偏低‌。

    确保孵育时间、温度等条件符合说明书要求。

    4.考虑基质效应

    若大量样本均低于空白值，可能是‌基质效应‌（样本基质干扰抗原-抗体结合）所致‌。此时需通过已知浓度的标准样品建立校正曲线来修正结果。

    5.其他注意事项

    样本避免反复冻融，防止蛋白降解‌。

    使用封板膜（如白色遮光膜）时，确保其透气性良好且密封性佳，避免孵育过程中液体蒸发或污染。

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    注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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