如何优化ELISA实验步骤以提高准确性?

　　如何优化ELISA实验步骤以提高准确性?

　　优化ELISA实验步骤的关键在于‌精准控制每个环节‌，以下是具体操作要点：

　　一、试剂与样本处理

　　试剂回温‌：提前20分钟将Washing Buffer(50×)和即用溶液从试剂盒中取出，室温平衡。

　　样本处理‌：血清/血浆/细胞上清需离心20分钟(2000~3000转/分)，仔细收集上清。

　　二、加样与孵育

　　加样技巧‌：

　　沿孔壁缓慢加入样本，避免气泡和冲击。

　　使用微量加样器，加入微孔底部，避免交叉污染。

　　加某种试剂结束封板后要振荡数秒混匀(特别说明的除外)。

　　孵育条件‌：

　　覆盖封板膜，在规定温度下足时孵育。

　　温度稳定在37°C(或说明书指定温度)。

　　严格遵守说明书规定的孵育时间，使用计时器精确控制。

　　三、洗板与显色

　　洗板操作‌：

　　手动洗板推荐加满洗涤液、静置60秒、甩干，重复3次，次在吸水纸上拍干。

　　避免非特异性结合，严格控制时间。

　　显色与终止‌：

　　加入TMB底物后避光显色，观察到标曲明显蓝色梯度即可终止。

　　加入终止液后，蓝色应立即变为黄色，并及时读数。

　　四、质量控制

　　质控品管理‌：

　　避免反复冻融，尽量一次配制，多支分装后使用。

　　确保质控品充分混匀，避免浓度分布不均。

　　试剂有效期‌：

　　注意试剂的有效期，避免灵敏度降低。

　　五、操作细节

　　封板膜选择‌：使用耐温性强的封板膜(如virya)。

　　避光操作‌：显色步骤需严格避光。

　　仪器校准‌：确保酶标仪波长设置正确(450nm)。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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