Elisa实验：样本OD值超出标准曲线范围?

　　Elisa实验：样本OD值超出标准曲线范围?

　　遇到样本OD值超出标准曲线范围的情况别慌，这通常是样本浓度过高或操作细节没到位导致的。天正信达整理好了关键原因和解决方案：

　　一、核心原因

　　样本浓度过高‌：目标蛋白浓度超过试剂盒检测上限(如80 pg/mL)

　　操作失误‌：包括试剂盒未回温、温度控制不当、孵育时间不准、洗涤过度等

　　仪器问题‌：酶标仪波长设置错误(应为450nm)

　　试剂问题‌：抗体稀释错误或水质不佳

　　二、解决方案

　　稀释样本‌：按预实验确定的稀释倍数重新检测，确保稀释液与样本基质匹配

　　优化操作‌：

　　试剂盒回温至25℃

　　控制孵育时间，避免洗涤冲击力过大

　　避光避风操作

　　调整仪器‌：确认酶标仪波长为450nm

　　更换试剂‌：使用娃哈哈矿泉水等纯净水，正确稀释抗体

　　三、注意事项

　　标准曲线质量‌：R²值应≥0.99，OD值需随浓度递减呈规律性变化

　　复孔检测‌：变异系数(CV)应<10%

　　显色优化‌：采用双波长校正(OD450–OD630)，显色液现配现用

　　四、进阶技巧

　　高浓度样本‌：参考文献调整稀释倍数，继续稀释直至OD值在标准曲线范围内

　　低浓度样本‌：降低稀释倍数，延长抗体孵育时间，或更换高灵敏度底物(如超敏TMB)

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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