ELISA法检测转录因子活性的具体步骤是什么?
ELISA法检测转录因子活性的灵敏度非常高,比传统的凝胶迁移实验(EMSA)高出约10倍。这种高灵敏度使得它能够检测到转录因子水平的微小变化,这对于研究细胞功能至关重要。
ELISA法检测转录因子活性的核心步骤包括:样本制备、包被、结合、检测、显色和读数。具体如下:
样本制备:提取细胞核蛋白,确保转录因子活性完整。
包被:将生物素标记的DNA探针包被于微孔板。
结合:加入核蛋白样本,转录因子与探针特异性结合。
检测:加入HRP标记的抗体,与转录因子结合。
显色:加入底物显色,孵育后加入终止液终止反应。
读数:用酶标仪测定450nm吸光度值,通过标准曲线计算活性。
注意:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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