如何判断RNA样本是否降解?

　　标签：天津天正信达 RNA逆转录试剂盒 逆转录试剂盒 PCR试剂盒 小鼠白介素ELISA试剂盒

　　判断RNA样本是否降解，最直接有效的方法就是‌琼脂糖凝胶电泳‌，它能直观显示RNA的完整性。天正信达小编来给你拆解一下具体怎么看：

　　一、电泳结果判断标准

　　条带清晰度‌：

　　优质RNA‌：28S和18S rRNA条带清晰、锐利，28S亮度约为18S的2倍。

　　降解RNA‌：条带模糊、弥散，或出现低分子量拖尾。

　　条带比例‌：

　　28S/18S亮度比正常为1.5–2:1，若比例明显降低(如接近1:1)，提示RNA降解。

　　加样孔污染‌：

　　加样孔出现荧光区带，可能提示DNA污染或RNA降解。

　　二、其他辅助方法

　　分光光度法‌：

　　测A260/A280(1.8–2.0)和A260/A230(>2.0)，比值异常可能提示污染或降解。

　　生物分析仪‌：

　　通过RIN值(RNA完整性数)评估，RIN>7为高质量，<5提示降解。

　　三、常见降解原因

　　RNase污染‌：操作环境或耗材未严格去RNase。

　　保存不当‌：未-80℃保存或反复冻融。

　　机械剪切‌：剧烈震荡或移液操作粗暴。

　　四、操作建议

　　电泳条件‌：1.2%琼脂糖凝胶，75–100V电泳至染料泳动2–3cm。

　　染色‌：用溴化乙锭(0.5 μg/mL)或SYBR绿Ⅱ染色10–30分钟。

　　防护‌：操作时戴手套，避免紫外线直接照射。

　　五、注意事项

　　防降解‌：全程冰上操作，使用RNase-free耗材。

　　gDNA污染‌：选择带gDNA去除功能的试剂盒。

　　引物选择‌：Oligo dT适合完整mRNA，随机引物适用性更广。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

　　天津天正信达供应：RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，我司拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。