如何判断RNA样本是否适合逆转录?

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　　判断RNA样本是否适合逆转录，主要看‌纯度、完整性和浓度‌这三个关键指标。天正信达小编来帮你快速梳理一下检测方法和标准：

　　一、纯度检测：分光光度计法

　　用分光光度计测A260/A280和A260/A230比值：

　　A260/A280‌：理想值1.8–2.0，低于1.8可能有蛋白污染，高于2.0可能有酚或胍盐残留。

　　A260/A230‌：应大于2.0，低于1.8可能提示有机溶剂或碳水化合物污染。

　　二、完整性检测：琼脂糖凝胶电泳

　　真核生物RNA电泳应显示三条带：28S、18S和5S rRNA，其中28S亮度约为18S的1.5–2倍。若出现拖尾或条带模糊，说明RNA降解;若28S和18S之间出现明亮条带，可能有gDNA残留。

　　三、浓度检测：分光光度计法

　　RNA浓度需根据实验需求调整，通常逆转录反应需1–5 μg总RNA或0.1–1 μg mRNA。浓度过低可能导致cDNA产量不足，过高可能抑制反应。

　　四、其他注意事项

　　避免降解‌：操作全程冰上，使用RNase-free耗材。

　　gDNA污染‌：选择带gDNA去除功能的试剂盒(如GeneCopoeia)。

　　引物选择‌：Oligo dT适合完整mRNA，随机引物适用性更广但片段短。

　　五、常见问题

　　RNA降解‌：检查电泳条带，避免反复冻融。

　　引物设计‌：避免gDNA扩增，或使用DNase I处理。

　　按这个标准检查，你的RNA样本应该就适合逆转录啦!

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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