Elisa的原理、操作及注意事项

　　Elisa的原理、操作及注意事项

　　ELISA(酶联免疫吸附测定)是检测微量物质标准，其原理和操作要点如下：

　　一、核心原理

　　固相化‌：抗原/抗体固定在微孔板表面，保持免疫活性。

　　酶标记‌：酶(如HRP)与抗体/抗原结合，形成酶标物。

　　显色反应‌：加入底物(如TMB)后，酶催化产生颜色变化，颜色深浅与待测物浓度成正比。

　　二、操作步骤

　　包被‌：将抗原/抗体稀释后加入微孔板，37℃孵育2-4小时或4℃过夜。

　　封闭‌：用BSA或脱脂奶粉封闭未结合位点，减少非特异性结合。

　　加样‌：加入待测样本，37℃孵育1小时。

　　洗涤‌：用PBST缓冲液洗涤3-5次，去除未结合物质。

　　加酶标抗体‌：加入酶标记的二抗，37℃孵育1小时。

　　显色‌：加入TMB底物，室温避光反应10-15分钟。

　　终止‌：加入硫酸终止反应，用酶标仪读取OD值。

　　三、注意事项

　　试剂选择‌：使用高特异性抗体，避免交叉反应。

　　操作规范‌：严格控制孵育时间和温度，避免蒸发。

　　干扰因素‌：类风湿因子(RF)可能导致假阳性，需预处理样本。

　　结果判定‌：设置阳性、阴性对照，确保结果可靠性。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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