ELISA实验中常见问题有哪些?

　　ELISA实验中常见问题有哪些?

　　ELISA实验中常见的问题主要集中在信号异常、重复性差和灵敏度不足这几个方面，天正信达来帮你梳理一下核心问题和应对方法：

　　一、信号异常问题

　　高背景或非特异性染色‌

　　原因‌：洗涤不充分、试剂污染、抗体浓度过高或孵育时间过长。

　　解决‌：增加洗涤次数和力度，优化抗体浓度，严格控制孵育时间。

　　所有孔均无颜色‌

　　原因‌：漏加关键试剂(如酶标物、显色剂)、试剂失活或严重污染。

　　解决‌：仔细检查试剂添加顺序，使用新鲜试剂，确保操作环境清洁。

　　阳性对照不显色/显色浅‌

　　原因‌：阳性对照孔漏加试剂、试剂活性下降或孵育条件不当。

　　解决‌：检查阳性对照设置，使用新鲜有效试剂，优化孵育温度和时间。

　　二、重复性问题

　　重复孔间差异大‌

　　原因‌：加样不准确、移液器未校准、洗板不均或温育条件波动。

　　解决‌：使用校准移液器，规范洗板操作，确保温育环境稳定。

　　整板OD值偏低‌

　　原因‌：孵育时间不足、温度偏低或未加终止液。

　　解决‌：延长孵育时间，确保温度准确(通常37℃)，及时加入终止液。

　　三、灵敏度问题

　　灵敏度低/信号弱‌

　　原因‌：试剂活性下降、显色时间不足或底物失效。

　　解决‌：使用新鲜试剂，优化显色时间，避光保存底物。

　　标准曲线不佳‌

　　原因‌：标准品配制错误、试剂保存不当或酶标仪设置错误。

　　解决‌：严格按照说明书配制标准品，规范试剂保存，校准酶标仪。

　　四、其他常见问题

　　假阳性/假阴性‌：由器具污染、样本内源性干扰或终止液问题引起。

　　样本无信号‌：可能因靶标浓度过低、存在抑制剂或Hook效应导致。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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