小鼠白介素Elisa试剂盒操作步骤

小鼠白介素Elisa试剂盒操作步骤

天正信达结合你此前关注的封板膜、荧光检测ELISA相关实验背景，小鼠白介素ELISA试剂盒的标准操作步骤如下，全程适配常规96孔板实验流程，可保障白介素定量结果的准确性：

一、实验前准备

设备与耗材‌：准备450±10nm滤光片的酶标仪、单/多通道精密移液器及枪头、用于样本稀释的Eppendorf管。

试剂预处理‌：若浓缩液中析出结晶，置于40℃水浴（温度不超过50℃）中温和加热至结晶溶解，使用前冷却至室温。

适用范围‌：该试剂盒为双抗体夹心法酶联免疫吸附实验，可对小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等生物流体中的白介素进行体外定量检测，仅用于科研用途，不可用于治疗或诊断场景。

二、标准品配制

将标准品管以10000×g转速离心1分钟，使管壁上的粉末沉降至管底。

向标准品管中加入1ml样本稀释缓冲液，标记为储备液，室温放置10分钟，多次颠倒混匀，也可使用低速涡旋振荡器振荡3-5秒。

以1000×g转速离心1分钟，收集管底液体并去除气泡。

标记7个Eppendorf管，分别标注1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64和空白，向每管中加入300μl样本稀释缓冲液，完成梯度稀释，得到系列浓度标准品。

三、正式实验操作

提前将所有试剂从冰箱取出，平衡至室温，避免低温导致的反应效率偏差。

设置标准品孔、待测样本孔和空白孔，每孔分别加入对应浓度的标准品或待测样本100μl，空白孔加入等量样本稀释缓冲液。

贴上封板膜，37℃温育1小时，选择适配的封板膜保障密封性，避免液体蒸发影响结果。

弃去孔内液体，无需洗涤，每孔加入检测试剂A工作液100μl，贴上封板膜，37℃温育1小时。

弃去孔内液体，每孔加入300μl洗涤缓冲液，浸泡1-2分钟后弃去液体，重复洗涤3-5次，最后一次拍干孔内残留液体。

每孔加入检测试剂B工作液100μl，贴上封板膜，37℃温育30分钟。

重复洗板5次，拍干孔内液体，每孔加入90μl TMB底物溶液，贴上封板膜，37℃避光显色10-20分钟，待标准品孔出现明显蓝色梯度即可终止反应。

每孔加入50μl终止液，轻轻晃动混匀，此时蓝色会立即转为黄色。

用酶标仪在450nm波长下依次测定各孔的OD值，读数需在加入终止液后15分钟内完成。

四、结果计算

以标准品的浓度为横坐标，对应的OD值为纵坐标，绘制标准曲线，根据待测样本的OD值，通过标准曲线计算出对应样本中小鼠白介素的实际浓度。

注：以上科研产品资料供参考，具体可咨询技术老师！

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