小鼠血管生长素（ANG）ELISA试剂盒科研使用说明书

小鼠血管生长素（ANG）ELISA试剂盒科研使用说明书

天正信达结合你此前关注的ELISA实验操作、封板膜适配等相关背景，小鼠血管生长素（ANG）ELISA试剂盒的科研使用说明书如下，全程适配常规96孔板实验流程，保障ANG蛋白定量结果的准确性：

一、产品基本信息

产品名称‌：小鼠血管生长素（ANG）ELISA检测试剂盒

产品货号：BS-2543

检测原理‌：采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验，通过特异性包被抗体捕获样本中的ANG蛋白，结合酶标二抗显色定量

适用样本‌：小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等生物流体

检测范围‌：常规规格为15.6 pg/mL —— 1000 pg/mL，可覆盖小鼠生理/病理状态下的ANG表达水平

用途限制‌：仅用于体外科研实验，不可用于临床诊断、人体检测或治疗相关场景

储存条件‌：未开封试剂盒2——8℃避光保存，有效期6个月，避免反复冻融

二、实验前准备

设备耗材‌：配备450nm滤光片的酶标仪、单/多通道移液器及对应枪头、96孔板适配封板膜、Eppendorf梯度稀释管

试剂预处理‌：若浓缩洗涤液低温析出结晶，置于37℃水浴温和加热至溶解，冷却至室温后使用

样本预处理‌：血清样本采集后室温静置2小时，3000×g离心15分钟取上清；细胞培养上清4℃ 1000×g离心20分钟去除细胞碎片，避免杂质干扰检测结果

三、标准品配制

将ANG标准品管以10000×g离心1分钟，使管壁冻干粉沉降至管底

加入1mL样本稀释液复溶，得到1000 pg/mL的标准储备液，室温放置10分钟充分混匀

标记7个梯度管，每管预先加入300μL样本稀释液，通过倍比稀释依次得到500、250、125、62.5、31.25、15.6 pg/mL系列浓度标准品，最后一管设为空白对照

四、实验操作步骤

所有试剂提前从冰箱取出，平衡至室温（20——25℃），避免低温导致反应效率偏差

设置标准品孔、待测样本孔、空白孔，每孔分别加入100μL对应液体，空白孔加入等量样本稀释液

贴上适配的封板膜，37℃温育2小时，长时间孵育推荐使用黑色铝箔膜保障密封性，避免液体蒸发

弃去孔内液体，无需洗涤，每孔加入100μL生物素化抗小鼠ANG检测抗体工作液，贴封板膜37℃温育1小时

弃去孔内液体，每孔加入300μL洗涤缓冲液，浸泡1——2分钟后弃液，重复洗板3——5次，最后一次在吸水纸上拍干孔内残留液体

每孔加入100μL亲和素~HRP工作液，贴封板膜37℃温育30分钟

重复洗板5次，拍干孔内液体，每孔加入90μL TMB底物溶液，贴封板膜37℃避光显色10——20分钟，待标准品孔出现清晰蓝色梯度即可终止

每孔加入50μL终止液，轻晃混匀，蓝色立即转为黄色

加入终止液后15分钟内，用酶标仪在450nm波长下测定各孔OD值

五、结果计算

以标准品ANG浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线，通过回归方程计算待测样本中ANG的实际浓度，若样本稀释过需乘以对应稀释倍数得到最终结果。

六、注意事项

不同批次试剂盒组分不可混用，避免交叉污染影响检测结果

实验全程需佩戴无粉手套，避免手上的外源蛋白、酶类污染孔板

若显色过慢，可适当延长37℃孵育时间，但不可超过30分钟，避免非特异性显色升高背景值

洗板时需保证每孔液体排空，残留洗涤液会直接影响后续酶促反应效率，导致结果偏差

注：仅用于科研实验，不可用于诊断或人体相关检测场景。

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