以下是猴α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒的实验说明书核心内容整理,综合多个高可信度来源: 一、实验原理 采用双抗体夹心法: 用纯化的猴IFN-α抗体包被微孔板,依次加入样本、HRP标记的检测抗体,形成复合物后通过TMB显色,颜色深浅与IFN-α浓度正相关。 二、试剂盒组成 组件 规格/说明 预包被板 96孔板(12孔×8条) 标准品 冻干粉(如480pg/ml),需稀释液重构 HRP标记抗体 含检测抗体、显色剂A/B液、终止液 浓缩洗涤液 30倍稀释使用(需蒸馏水配制) 辅助材料 封板膜、密封袋、说明书 三、样本处理 血清/血浆 室温静置后离心(2000-3000g,20分钟),避免溶血或脂血。 长期保存需-20℃,避免反复冻融。 组织匀浆 用PBS(含蛋白酶抑制剂)匀浆后离心取上清,建议稀释后检测。 四、操作步骤 标准品稀释 梯度稀释(如480→240→120→60→30→15 pg/ml),空白孔用稀释液。 加样与孵育 每孔加50μL样本或标准品,37℃孵育30-60分钟。 洗涤 手工洗板需拍干,重复5次;洗板机建议清洗5次。 显色与终止 加TMB避光反应15分钟,终止后15分钟内测450nm OD值。 五、注意事项 环境控制:显色阶段需避光,试剂使用前室温平衡15-30分钟。 干扰物:避免含NaN3的样本(抑制HRP活性)。 质量控制:建议标准品和样本做复孔,CV值应<15%。 六、技术参数 项目 参数范围 检测范围 6.25-1000pg/ml(不同品牌有差异) 灵敏度 通常<15pg/ml 有效期 未开封2-8℃保存6个月,开封板条需密封防潮 如需完整说明书或操作视频,建议联系供应商获取随货文件。 注:以上资料仅供参考,不同品牌产品可能存在设计差异,操作前建议参考说明书。 |