鸡沙门氏菌抗体(Salmonella-Ab)ELISA试剂盒实验使用说明书 一、实验原理 本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术，通过预包被沙门氏菌抗体的微孔板与样本中的目标抗体结合，再通过酶标二抗显色反应，最终通过吸光度值定量检测鸡血清/血浆中的沙门氏菌抗体水平。 二、试剂盒组成 组分规格保存条件 预包被微孔板96T/48T2-8℃密封 标准品(含阴性/阳性对照)6瓶(0-8.1ppb梯度)2-8℃ 酶标二抗6ml2-8℃避光 TMB底物液A/B各6ml2-8℃避光 终止液(2M溶液)6ml室温 浓缩洗涤液(20×)20ml2-8℃ 三、样本处理 血清/血浆：采集后室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清-20℃保存(避免反复冻融)。 组织匀浆：按1:9比例加入PBS，冰上研磨后5000×g离心5分钟取上清。 注意事项：溶血样本需离心过滤后使用。 四、操作步骤 加样 标准品孔：加入50μL不同浓度标准品(0-8.1ppb) 。 样本孔：先加40μL稀释液，再加入10μL样本(终稀释度5倍)。 孵育：37℃避光孵育60分钟，封板膜密封。 洗涤：弃液后每孔加满洗涤液，静置30秒，重复5次，拍干。 显色：每孔加TMB底物A/B各50μL，37℃避光显色15分钟。 终止：每孔加50μL终止液，立即测定OD450值。 五、关键注意事项 移液精度：使用校准后的移液枪(误差<2%)，枪头需“一头一换。 温度控制：试剂需提前30分钟恢复室温，避免水浴加热。 避光操作：TMB底物全程避光，显色时用锡纸覆盖酶标板。 安全防护：终止液含强酸，需戴手套操作。 六、结果分析 以标准品浓度(ppb)为横坐标，OD450值为纵坐标绘制标准曲线。 样本浓度通过曲线方程计算，OD值超出标准曲线范围时需稀释复测。 七、贮存与有效期 未开封试剂盒：2-8℃保存6个月。 开封后微孔板：密封干燥保存，避免受潮。 | 
