DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶

　　DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶

　　DNA Polymerase 是一款超高保真 DNA 聚合酶，其采用蛋白融合技术且具有通用引物退火功能。它是一款融合到持续合成能力增强域的火球菌属样校正 DNA 聚合酶，使 Profusion™ DNA 聚合酶产生具有高准确度、灵敏度和抑制剂耐受性的 PCR 序列。 该酶具有 5’→3’DNA 聚合酶活性和 3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是 Taq DNA 聚合酶的 100倍。 酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增速度达到 15-30sec/kb ，扩增目的片段的长度可长达 20 kb。本产品配备了优化缓冲液，添加了 PCR 增强组分，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

　　产品组分

　　组分名称规格

　　HRF0085   HRF0086   HRF0087

　　(100 U)  (500 U)   (1000 U)

　　Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL)50 μL250 μL250 μL×2

　　2×Profusion™ PCR buffer (含 Mg2+ )1 mL×31 mL×151 mL×30

　　10mM dNTP100 μL500 μL1000 μL

　　6×DNA loading buffer1 mL1 mL×51 mL×10

　　产品应用

　　1.高保真 PCR

　　2.基因克隆

　　3.生成测序模板

　　4.高 GC 含量 PCR

　　5.长片段 PCR(长达 20 kb)

　　6.突变

　　7.高通量 PCR

　　活性定义

　　用活性化的大马哈鱼精子 DNA 为模板/引物， 74℃ ，30 min 内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 U。

　　运输和保存方法

　　冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

　　推荐PCR反应体系(冰盒上配制)

　　组分体积(μL)终浓度

　　ddH2Oto 50 μL-

　　2×Profusion™ PCR buffer (含 Mg2+ )25 μL1×

　　10mM dNTP1uL0.2mM

　　DNA 模板适量-

　　Primer 正向 (10 μM)2.5 μL0.5 μM

　　Primer 反向 (10 μM)2.5 μL0.5 μM

　　Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL)0.5 μL1 U/50 μL

　　【注】

　　1)试剂使用：使用前请充分融解和混匀。

　　2)聚合酶浓度：推荐使用 1 U/50 μL，可以在 0.5-2 U/50 μL 之间进行优化，不要超过2 U/50 μL。

　　3)聚合酶添加：高保真酶有 3’→5’外切酶活性，可能会降解引物，配制反应体系时，酶应该在最后添加。

　　4)Mg2+终浓度： 体系终浓度为 1.5 mM。如有特殊需要，可用 50 mM MgCl2，以 0.2-0.5 mM 为间隔向上摸索。

　　5)高 GC 模板： 高GC含量的片段扩增时，体系中加入终浓度为 3%的 DMSO 有利于扩增，可明显的提高扩增的效率。

　　不同模板的推荐使用量(50 μL 反应体系)：

　　模板种类扩增片段1kb-10kb

　　基因组 DNA50 ng-250 ng

　　质粒或病毒 DNA1pg-10 ng

　　cDNA1-5 μL (不超过 PCR 反应总体积的10%)

　　PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

　　两步法(优先推荐)

　　循环步骤温度时间 循环数

　　预变性98℃30s1

　　变性98℃5-10 sec25-35

　　延伸72℃15-30 sec/kb

　　终延伸72℃5-10 min1

　　三步法 (常规程序)

　　循环步骤温度时间 循环数

　　预变性98℃30 sec1

　　变性98℃5-10 sec25-35

　　退火65℃10-30 sec

　　延伸72℃15-30 sec/kb

　　终延伸72℃10 min1

　　【注】

　　1)预变性温度和时间： 推荐温度： 98℃ ，时间： 30S ，复杂和高 GC 含量模板 3 min。

　　2)退火温度和时间： 推荐温度： 72℃，也可根据需要， 设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。

　　3)延伸温度和时间： 推荐温度： 72℃ 。时间： 30 sec/kb ，复杂模板根据实际情况可延长至 60 sec/kb。

　　4)扩增产物： 请将 PCR 扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。

　　注意事项

　　1、本产品仅作科研用途!

　　注：以上资料仅供参考，如需完整说明书，建议联系供应商获取最新版本。

　　天津天正信达供应：RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，我司拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。