ELISA试剂盒的测定方法及要求

　　标签：Elisa 本生试剂盒 标准品 抗体 封板膜 一次性吸头

　　以下是天正信达ELISA试剂盒的测定方法及要求的详细说明：

　　一、测定方法‌

　　标准品稀释与加样‌

　　在酶标包被板上设标准品孔，加入不同浓度的标准品溶液。

　　待测样本需用稀释液适当稀释后加入对应孔中，避免浓度过高影响检测线性。

　　孵育‌

　　用封板膜密封后置于37℃恒温环境孵育30-90分钟(具体时间依试剂盒说明)。

　　孵育时需保持板孔水平，避免液体分布不均。

　　洗涤‌

　　弃去孔内液体，每孔加入洗涤液(如含0.05%吐温-20的PBS)300μl，静置30秒后弃去，重复4-6次。

　　最后一次洗涤后需在吸水纸上拍干，避免残留液体干扰显色。

　　酶标抗体结合‌

　　加入HRP标记的检测抗体或酶结合物工作液(100μl/孔)，37℃孵育30-60分钟。

　　显色与终止‌

　　加入TMB底物溶液(100μl/孔)，避光反应15-30分钟，观察显色梯度。

　　加入终止液(50μl/孔)后，颜色由蓝变黄，15分钟内测定OD值。

　　结果计算‌

　　以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，计算样本浓度。

　　二、实验要求‌

　　样本处理‌

　　血清/血浆‌：需离心(2000-3000rpm，20分钟)去除纤维蛋白或抗凝剂干扰。

　　组织样本‌：需匀浆后离心取上清，避免细胞碎片影响检测。

　　试剂准备‌

　　浓缩洗涤液需按比例稀释(如1:20)，现配现用。

　　酶标抗体和底物需避光保存，使用前平衡至室温。

　　操作规范‌

　　加样时需避免气泡，液体应加至孔底而非孔壁。

　　每步孵育后需严格洗涤，减少非特异性结合。

　　质量控制‌

　　需设置空白孔、阴性对照和阳性对照，确保实验有效性。

　　板内和板间变异系数应<15%，标准曲线R²≥0.9900。

　　储存条件‌

　　未开封试剂盒需2-8℃保存，避免冷冻或高温。

　　开封后微孔板应密封防潮，部分试剂需-20℃保存。

　　三、注意事项‌

　　避免污染‌：使用一次性吸头，不同试剂避免交叉污染。

　　显色控制‌：TMB显色时间过长可能导致本底升高，需及时终止。

　　数据记录‌：需详细记录加样时间、稀释倍数等参数，便于溯源。

　　具体操作请以试剂盒说明书为准。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实际标准，具体请咨询技术老师。

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