如何降低ELISA试剂盒实验误差概率

　　标签：Elisa 本生试剂盒 标准品 抗体 封板膜 一次性吸头 大鼠试剂盒

　　以下是天正信达对降低ELISA试剂盒实验误差概率的详细建议，综合实验操作、样本处理和质量控制等关键环节：

　　一、试剂与仪器管理‌

　　试剂质量控制‌

　　使用前检查试剂盒有效期，过期试剂不可使用。

　　不同批号试剂禁止混用，浓缩洗涤液需现配现用。

　　酶标抗体和底物避光保存，使用前平衡至室温(20-25℃)。

　　仪器校准‌

　　移液器需定期校准(至少每年1次，高频使用建议每3-6个月1次)。

　　小体积加样时选择接近最大量程的移液器，避免使用排枪(易跳孔)。

　　二、样本处理规范‌

　　样本采集与保存‌

　　血清/血浆：采集后充分凝固(37℃ 1小时或室温延长)，离心(2000-3000rpm，20分钟)去除纤维蛋白。

　　避免溶血、脂血或细菌污染样本，此类样本需预处理后检测。

　　长期保存需分装，-20℃以下冻存，避免反复冻融。

　　样本稀释‌

　　高浓度样本需稀释至标准曲线范围内，稀释倍数建议<10倍。

　　稀释时充分混匀，避免浓度梯度误差。

　　三、实验操作优化‌

　　加样与孵育‌

　　加样顺序：从低浓度到高浓度，减少跳孔风险。

　　加样量精准，避免孔壁残留或气泡，每步操作时间控制在10分钟内。

　　孵育时密封板孔，37℃恒温(±0.5℃)，避免温度波动。

　　洗涤步骤‌

　　手工洗板需垂直拍干，自动洗板机检查管路通畅性。

　　洗涤液注满孔(300μl/孔)，洗涤4-6次，去除未结合物质。

　　显色控制‌

　　TMB显色避光反应，时间严格按说明书(通常15-30分钟)。

　　显色过弱需检查酶标抗体活性，过强可能需缩短时间。

　　四、质量控制措施‌

　　对照设置‌

　　每板需设空白孔、阴性对照和阳性对照，验证试剂和操作有效性。

　　阳性对照OD值≥0.8，阴性对照OD值≤0.2，否则实验无效。

　　重复性与数据分析‌

　　每个样本做双复孔，板内变异系数<15%。

　　标准曲线R²≥0.9900，样本浓度需落在曲线线性范围内。

　　五、环境与细节管理‌

　　温湿度‌：操作环境温度15-40℃，湿度15%-85%，孵育时使用湿盒维持稳定。

　　污染防控‌：使用一次性吸头，避免说话或唾液污染板孔。

　　通过以上措施可系统性降低误差概率，具体参数需结合试剂盒说明书调整。

　　注：以上资料仅供参考，不作为实际标准，具体请咨询技术老师。

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