科研实验知识：ELISA 试剂盒原理

　　科研实验知识：ELISA 试剂盒原理

　　ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种基于抗原-抗体特异性结合的高灵敏度检测技术，其核心原理是通过酶标记放大信号，实现目标物质的定性与定量分析。以下是天正信达技术小编对其关键原理和特点的详细解析：

　　一、基本原理

　　抗原-抗体特异性结合‌

　　ELISA利用抗原与抗体的高亲和力结合特性，将待测物(抗原或抗体)与固相载体(如聚苯乙烯微孔板)上的抗体或抗原结合，形成稳定复合物‌。例如，夹心法ELISA中，目标抗原被两种抗体“夹心"捕获，确保高特异性‌。

　　酶标记信号放大‌

　　通过将酶(如辣根过氧化物酶HRP)标记在抗体或抗原上，催化底物(如TMB)显色，将微量结合信号转化为可检测的光信号‌。显色强度与目标物浓度呈正比，通过酶标仪测定吸光度(OD值)实现定量‌。

　　固相载体与洗涤步骤‌

　　抗原或抗体通过物理吸附或共价偶联固定在微孔板表面，洗涤步骤可去除未结合物质，降低背景干扰‌。洗涤是实验成功的关键‌。

　　二、主要类型及特点

　　直接法‌

　　酶标记的一抗直接与目标抗原结合，操作简单但灵敏度较低‌。

　　间接法‌

　　通过酶标二抗检测一抗，信号放大效果更显著，适用于低丰度目标物‌。

　　夹心法‌

　　需两种抗体分别捕获和检测抗原，特异性高，适用于复杂样本(如血清)‌。

　　竞争法‌

　　用于检测小分子抗原，通过竞争结合减少显色信号，适用于药物残留分析‌。

　　三、技术优势与局限

　　优势‌：

　　灵敏度高(可检测pg/mL级目标物)‌;

　　通量大(96孔板设计)‌;

　　适用于多种样本(血清、组织匀浆等)‌。

　　局限‌：

　　抗体质量直接影响结果‌;

　　易受样本中干扰物(如类风湿因子)影响‌。

　　四、应用场景

　　ELISA试剂盒广泛应用于：

　　疾病诊断‌：如检测炎症因子(IL-6、TNF-α)预测疾病进展‌;

　　药物研发‌：监测生物标志物(如白蛋白)评估药效‌;

　　食品安全‌：检测病原微生物(如沙门氏菌)‌。

　　五、操作关键点

　　封闭步骤‌：使用BSA或脱脂奶粉封闭未结合位点，减少非特异性吸附‌。

　　孵育时间‌：需严格控制(通常37℃孵育1-2小时)以确保充分结合‌。

　　显色控制‌：底物反应时间过长易导致背景升高‌。

　　注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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