miRNA荧光定量PCR试剂盒的核心原理

  　miRNA荧光定量PCR试剂盒的核心原理是通过特异性逆转录和荧光信号检测实现对微小RNA的精准定量，主要分为茎环法和加尾法两种技术路线，结合SYBR Green染料或TaqMan探针的荧光检测机制‌。以下是具体原理解析：

　　一、逆转录原理

　　茎环法‌

　　通过设计含茎环结构和miRNA 3'端互补序列的特异性引物，逆转录酶延伸后生成加长版cDNA。该方法需为每个miRNA设计独立引物，特异性高但操作复杂‌。

　　加尾法‌

　　利用Poly(A)聚合酶为所有miRNA添加Poly(A)尾，再通过Oligo dT通用引物逆转录。优势在于可同时检测多个miRNA，适合高通量筛选‌。

　　二、荧光检测原理

　　SYBR Green染料法‌

　　染料嵌入双链DNA后发射荧光，信号强度与产物量成正比。需注意引物二聚体可能导致的假阳性‌。

　　TaqMan探针法‌

　　探针5'端标记荧光基团(如FAM)，3'端为淬灭基团。PCR延伸时Taq酶切割探针释放荧光，实现靶标特异性检测，灵敏度更高‌。

　　三、试剂盒设计特点

　　TaqMan基因表达检测试剂盒‌：包含未标记引物和5'端标记FAM/VIC染料、3'端含MGB/NFQ的探针，通过5'核酸酶活性实现信号释放‌。

　　TaqMan SNP基因分型试剂盒‌：采用两条等位基因特异性探针(标记不同染料)，适用于SNP分析‌。

　　四、技术优势

　　茎环法特异性强，适合低丰度miRNA检测‌;

　　加尾法通量高，适合多miRNA联合分析‌;

　　TaqMan探针法可区分单碱基差异，适用于基因分型‌。

　　当前主流试剂盒(如TaqMan Advanced miRNA)通过优化逆转录和探针设计，实现了高灵敏度与操作简便性的平衡‌。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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