有哪些常见的ELISA实验问题及解决方案?
以下是ELISA实验中常见问题及解决方案的总结，天正信达结合了资料整理：
一、标准曲线异常
无显色/显色极弱
可能原因：标准品混合不充分或失活、漏加关键试剂(如检测抗体/TMB底物)
解决方案：温和混匀标准品(轻弹管底或颠倒混匀)，避免涡旋震荡;严格按顺序添加试剂并检查有效期
线性不佳
可能原因：标准品浓度不准确、酶标仪误差
解决方案：重新标定标准品浓度，校准仪器，确保抗体均匀性
二、样本孔问题
样本不显色
可能原因：目标蛋白浓度低于检测限、样本基质干扰(如高盐/脂类)
解决方案：预稀释样本或更换高灵敏度试剂盒;优化样本处理(如离心去除杂质)
假阳性/高背景
可能原因：非特异性结合(如抗体交叉反应)、洗涤不净
解决方案：使用同源血清封闭、增加洗涤次数;选择高纯度抗体
三、重复性差
可能原因：加样误差、孵育条件不一致
解决方案：校准移液器，统一操作流程(如使用振荡器孵育)
四、其他关键问题
试剂活性失效
表现：全板不显色
处理：检查TMB底物和酶标抗体储存条件(避光/低温)
样本处理不当
避免溶血(血红蛋白干扰显色)和反复冻融
建议：新鲜样本4℃短期保存，长期保存需分装-80℃
注：具体操作需结合试剂盒说明书，不同方法(如夹心法/竞争法)可能需调整方案。
注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒
Elisa试剂盒 天津天正信达供应：RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，我司拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。
