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生化检测试剂盒
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以下是天正信达人转化生长因子β1(TGF-β1) ELISA试剂盒 的标准化说明及操作指南:
BS-0089 人转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒
一、检测原理
采用 双抗体夹心法:
预包被抗人TGF-β1抗体的微孔板捕获样本中的目标蛋白
加入标记的检测抗体,形成“抗体-抗原-酶标抗体"复合物
HRP催化TMB显色,450nm波长测定OD值,浓度与吸光度正相关
二、核心参数
项目 规格
检测范围 31.25-2000pg/mL(部分品牌62.5-4000pg/mL)
灵敏度 ≤18.75pg/mL 或 11.86pg/mL
样本类型 血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、细胞培养上清、组织匀浆
变异系数 板内/板间CV均<10%
回收率 83-108%(血清/血浆)
三、试剂盒组成
预包被微孔板:96T或48T配置
标准品:冻干粉(400ng/mL起始浓度)
检测抗体:标记抗TGF-β1抗体
显色系统:TMB底物A/B、终止液(2M硫酸)
洗涤缓冲液:需蒸馏水稀释
四、实验步骤
1. 样本处理
血清/血浆:2000-3000rpm离心20分钟,避免溶血
组织样本:PBS匀浆后离心取上清
保存条件:-20℃分装,避免反复冻融(≤3次)
2. 标准曲线制备
冻干标准品复溶后梯度稀释(如2000→31.25pg/mL)
3. 检测流程
加样:标准品/样本50μL/孔,37℃孵育120分钟
洗涤:6次,扣干残液
加酶标抗体:100μL/孔,37℃ 60分钟
显色:TMB避光反应15分钟→终止液终止
读值:450nm主波长,630nm参比
五、注意事项
质量控制
每板需设空白孔和标准曲线孔
标准曲线R²应≥0.99
操作规范
试剂使用前需平衡至室温
避免底物接触金属离子或氧化剂
数据解读
OD值超出标准曲线范围需稀释复测
六、常见问题
边缘效应:预温育板条至37℃可减少孔间差异
显色异常:检查TMB是否避光保存,HRP是否失活
注:不同品牌组分可能差异(如预包被板/冻干抗体),需严格按说明书操作。
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